图1 ｜造模后8 周两组大鼠胰岛组织切片苏木精-伊红染色(×100)Figure 1 ｜Hematoxylin-eosin staining of pancreatic islet tissue at 8 weeks after modeling in the two groups (×100)图注：图A 为对照组；B 为模型组。与对照组相比，模型组胰岛细胞明显稀疏

图2 ｜两组大鼠胫骨Micro-CT 扫描及三维重建Figure 2 ｜Micro-CT scan and three-dimensional reconstruction of the rat tibia in the two groups图注：对照组大鼠骨组织皮质骨均匀，骨小梁较为致密；与对照组相比模型组大鼠骨髓腔明显增大，骨小梁断裂并且稀疏

图3 ｜两组大鼠胫骨Micro-CT 扫描数据分析Figure 3 ｜Micro-CT scan data of the rat tibia in the two groups图注：aP＜ 0.05

图4 ｜造模后8 周两组大鼠股骨苏木精-伊红染色及Masson 染色观察(×20)Figure 4 ｜Hematoxylin-eosin staining and Masson staining of the ratfemur at 8 weeks after modeling (×20)图注：图A(对照组)，B(模型组)为苏木精-伊红染色；C(对照组)，D(模型组)为Masson 染色。对照组大鼠骨小梁清晰，排列密集，骨小梁间距较小；与对照组相比模型组大鼠小梁稀疏，排列紊乱，骨小梁间距较大

3 讨论 Discussion

糖尿病是一组以血糖浓度高为特征的慢性疾病，糖尿病患者中大部分为2 型糖尿病，胰岛素抵抗是其发生的主要因素[13]。2 型糖尿病并发症较多且严重，其中糖尿病骨质疏松症是其主要并发症之一。糖尿病性骨质疏松的发病率逐年上升，但其的发病机制目前尚未能明确，如今认为与高糖状态下出现血钙水平异常，导致骨代谢异常等多种因素相关[14]。所以快速建立一个稳定的糖尿病性骨质疏松模型对深入研究糖尿病性骨质疏松的发病机制及治疗方法至关重要。高糖食物可造成动物模型高胰岛素血症，而高脂肪食物可导致动物模型胰岛素分泌功能减退，使机体糖耐量降低[15]，通过高脂高糖喂养可形成胰岛素抵抗，并导致高胰岛素血症的形成。单纯给予高脂高糖饮食诱导建立糖尿病骨质疏松症模型时间较长，费用高，成模稳定性较差。

链脲佐菌素是一种广谱抗菌素，具有抗菌、抗肿瘤的作用，同时研究发现其对动物胰岛β 细胞具有特异性的毒性作用，其作用机制是选择性损伤胰岛B 细胞，导致胰岛素分泌减少[7]。大鼠采用高脂高糖饮食诱导4 周后，会产生胰岛素抵抗，即表现为其胰岛素受体与胰岛素的结合能力减弱，当分泌相同剂量的胰岛素时，产生降低血糖的效应也会降低[16-18]。虽然胰岛素抵抗最终也会表现出高血糖的体征，但此过程需要较长的时间才能够出现。大多数糖尿病动物模型建立实验，对时间都会有所要求，都希望能够缩短实验时间，所以模型组采用高糖高脂饮食诱导和药物干预相结合的方法 ，将成年SD 大鼠高糖高脂饮食诱导一段时间，以诱导出胰岛素抵抗，再联合腹腔注射小剂量的链脲佐菌素，以此来加速糖尿病的进程，最终建立2 型糖尿病大鼠模型，该方法具有制造方法简便、药物毒性低、特异性高等优点。

经典的糖尿病诊断标准为：典型糖尿病症状(多饮、多尿、多食、不明原因的体质量下降)加上随机血糖≥11.1 mmol/L或加上空腹血糖≥7.0 mmol/L[19-20]。对于此次实验糖尿病的诊断，研究选择在造模后3，7，10，14，21 d，对模型组大鼠的体质量及血糖进行测量及造模前、造模后每日对大鼠生命体征等一般状况进行观察比较，结果表明模型组大鼠血糖明显升高，体质量呈现出先下降、后稍回升的趋势，体型消瘦，每日饮水量、饮食量及尿量明显增多；造模后3，7，10，14，21 d 后连续3 次测得空腹血糖均≥ 16.7 mmol/L；这些生命体征表现都与临床上 2 型糖尿病患者的临床表现及症状相近。以上结果说明了模型组大鼠已具有了糖尿病症状及表现，并且模型组大鼠的发病过程及临床表现与2 型糖尿病相类似，这与实验的预期结果相同。由于2 型糖尿病具有较多的发病原因，因此无论是诱导性、自发性、遗传性还是转基因动物模型，都不可能将糖尿病的发病及发展过程完全表现出来[21]。而此次实验通过给予高糖高脂饮食并结合链脲佐菌素建立了大鼠糖尿病模型，该模型的发病过程及临床表现与人类糖尿病相类似，因而可以用于糖尿病及其并发症的相关研究。此外，该模型动物不需要使用药物来维持生命时间，这与其他实验相比较，具有独特优势，虽然部分模型大鼠血糖与之前比较稍有所降低，但仍然高于对照组的正常水平，这与临床上2 型糖尿病患者早期通过减轻体质量来改善胰岛素抵抗的表现相类似。

目前对骨质疏松的评价，DEXA 法测量骨密度是大多数相关报道的常用评价方法，但是此方法存在不能完全体现骨强度的变化以及无法反映骨结构的缺点[22]。目前也有相关文献报道采用 Micro-CT 扫描技术来评价小动物骨质疏松症。Micro-CT 检查是一种非侵入性、非破坏性的高分辨率检查骨骼微结构的方法[23]。此次实验亦采用Micro-CT 扫描技术来评价大鼠的骨质疏松症，一方面，Micro-CT 能够将大鼠骨骼的三维解剖结构清晰地呈现出来，从不同角度观察大鼠骨质的变化；另一方面，通过Micro-CT 扫描，可以测定大鼠的骨体积、骨小梁数量及骨小梁间距值，通过统计学分析，模型组与对照组比较，差异有显著性意义。实验对骨质疏松症鉴定的另外一个方法为制作股骨组织切片，造模后8 周，取两组大鼠股骨组织切片进行苏木精-伊红染色和Masson 染色，通过比较发现，与对照组相比，模型组大鼠骨髓腔明显增大、骨小梁间距明显加宽，骨小梁变细、断裂，骨小梁之间明显疏松紊乱，这些均是典型的骨质疏松改变，与Micro-CT 扫描结果相一致，证明了骨质疏松模型建立的成功。

文章来源：《糖尿病天地(临床)》 网址: http://www.tnbtd.cn/qikandaodu/2021/0224/673.html