1.4.3 生命体征观察 造模前及造模后每日对模型组和对照组大鼠的生命体征及一般状况进行观察比较，主要观察大鼠的食量、尿量、毛发、精神状态等指标，观察并记录。

1.4.4 大鼠尾静脉血糖及体质量测量 测量时保证大鼠在安静、温暖、通风、熟悉的环境下实施，给药前及给药后3，7，10，14，21 d，在空腹状态下测体质量及剪尾取血，测其血糖值，每次每一只均测量3 次，取其平均值，作为最终结果并纪录统计，每次测量前后对大鼠尾部均采用碘伏进行消毒。

1.4.5 糖尿病成功检测标准 模型组大鼠一次性左下腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg)后，于3，7，10，14，21 d 后测量大鼠空腹血糖，连续3 次测得空腹血糖均≥ 16.7 mmol/L，则为糖尿病造模成功[11-12]。

1.4.6 胰岛组织切片观察 在分别注射链脲佐菌素和柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液8 周后，采用注射过量 1%戊巴比妥(40 mg/kg)麻醉药物法处死大鼠。分别解剖出两组大鼠胰岛组织，并将其固定于 40 g/L 多聚甲醛溶液中，然后均制备苏木精-伊红染色切片。

1.4.7 胫骨Micro-CT 分析 给药8 周后处死大鼠，在无菌条件下解剖胰岛组织时，同时取下大鼠双侧股骨及胫骨，剔除股骨及胫骨表面肌肉及骨膜，迅速放入新鲜配制的40 g/L 多聚甲醛固定液中进行固定，4 ℃固定24 h 后取出；采用Micro-CT机扫描胫骨干骺端，观察骨组织结构。扫描条件为：电压80 kV； 电流 500 μA；分辨率10.5 μm，曝光时间200 ms，扫描的层数1 200 层。用三维重建处理对两组大鼠胫骨骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)进行检测。

1.4.8 股骨组织学分析 采用PBS 多次充分清洗固定后的大鼠股骨组织，清洗后放入4 ℃ 10%EDTA(pH 8.0)的溶液中，进行脱钙。20 d 后，待骨组织脱钙完全，常规用乙醇进行梯度脱水、二甲苯透明，石蜡包埋，连续纵行组织切片，厚5 μm，制备切片，进行Masson 染色及苏木精-伊红染色，在光学显微镜下观察两组大鼠骨组织结构。

1.5 主要观察指标 ①两组大鼠造模前后体质量及空腹血糖水平；②胰岛组织切片观察结果；③大鼠胫骨Micro-CT 扫描结果；④股骨组织切片分析结果。

1.6 统计学分析 采用SPSS 17 统计软件进行分析。收集每次测量体质量及血糖的数据，将所有数据进行正态性检验，其中正态分布或近似正态分布的计量资料描述以±s表示，正态分布采用两样本的t检验，若方差不齐采用t检验，非正态分布数据者采用秩和检验。其余数据进行单因素方差分析，计算结果以±s形式表示，检验水准取值 0.05(α=0.05)，P＜ 0.05为差异有显著性意义。

2 结果 Results

2.1 实验动物数量分析 对照组16 只进入结果分析，模型组造模成功12 只进入结果分析。

2.2 两组大鼠一般状况 对照组大鼠在注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液后生长良好，体质量逐渐增加，毛发整齐光亮，精神状态良好，血糖稳定在正常范围之内，并且无其他症状的出现。模型组大鼠在注射链脲佐菌素后，每日食量、饮水量及尿量明显逐渐增加，体型逐渐消瘦，精神不振，反应及活动明显迟钝，毛发明显蓬散杂乱，大鼠逐渐表现为三多一少的糖尿病症状。

2.3 造模前后两组大鼠体质量比较 与对照组相比，模型组大鼠体质量明显降低(P＜ 0.05)，差异有显著性意义。见表1。

表1 ｜造模前后两组大鼠体质量比较 (±s，g)Table 1 ｜Comparison of the body mass of rats between two groups before and after modeling表注：与对照组比较，aP＜ 0.05时间 对照组(n=16) 模型组(n=12)注射前 328.2. 336.注射后3 d 330. 320.注射后7 d 334. 315.注射后10 d 339. 310.注射后14 d 343. 327.注射后21 d 355. 338.

2.4 两组大鼠空腹血糖水平 与对照组大鼠空腹血糖相比较，模型组大鼠空腹血糖在注射链脲佐菌素后明显升高(P＜0.001)，差异有显著性意义。见表2。

2.5 胰岛组织切片观察 造模后8 周两组大鼠胰岛组织切片木精-伊红染色见图1。与对照组相比，模型组胰岛细胞明显稀疏。

2.6 Micro-CT 检测结果 造模后8 周两组大鼠胫骨Micro-CT扫描及三维重建见图2,3。对照组大鼠骨组织皮质骨均匀，骨小梁较为致密；与对照组相比模型组大鼠皮质骨增厚，骨髓腔明显增大，骨小梁断裂并且稀疏。

2.7 股骨组织切片分析结果 造模8 周两组大鼠股骨苏木精-伊红染色切片镜下观与Masson 染色切片镜下观察见图4。

表2 ｜造模前后两组大鼠血糖水平比较 (±s，mmol/L)Table 2 ｜Comparison of the blood glucose levels of rats between the two groups before and after modeling表注：与正常对照组比较，aP＜ 0.05时间 对照组(n=16) 模型组(n=12)注射前 4. 4.注射后3 d 4. 23.注射后7 d 4. 19.注射后10 d 4. 19.注射后14 d 4. 20.注射后21 d 4. 19.

文章来源：《糖尿病天地(临床)》 网址: http://www.tnbtd.cn/qikandaodu/2021/0224/673.html